La búsqueda directa de los microorganismos patógenos causantes de enfermedades hídricas no se realiza con frecuencia en los exámenes bacteriológicos de aguas. Estas bacterias son de vida precaria fuera del organismo animal; casi siempre llegan a los cursos de agua en forma intermitente y en reducido número. Esto provoca que su investigación, ya de por sí laboriosa, pocas veces de resultados satisfactorios.

 

El objetivo es determinar la calidad higiénica del agua en una forma directa, como es la investigación de bacterias típicas del intestino humano o animal. Este es un método seguro, relativamente rápido y de extrema sensibilidad. Una muestra de agua que contenga bacterias de origen intestinal indica la existencia de una contaminación fecal, y por lo tanto la posibilidad de contener bacterias patógenas intestinales, lo cual es potencialmente peligroso.

Entre las bacterias de origen intestinal se han elegido como indicadores de contaminación las que integran el grupo coliforme, es decir,bacilos Gram (-) no esporulados que fermentan lactosa con producción de ácido y gas.

 

Determinación de bacterias mesófilas

Objetivo:

Determinar cuantitativamente la cantidad de bacterias mesófilas totales mediante el método de recuento en profundidad.

 

Materiales:

3 cajas de Petri

Agar nutritivo o agar recuento estéril (PCA)

3 tubos estériles

Pipetas de 1 y 10 ml estériles

Agua destilada estéril

Muestra de agua

 

Procedimiento:

Se efectúan tres diluciones a partir de una muestra de agua contaminada empleando agua destilada estéril. Deben utilizarse tubos de ensayo y pipetas estériles.

Si se trata de aguas poco contaminadas, se utilizará la muestra original y dos diluciones de 1/5 y 1/10.

Si se trata de aguas muy contaminadas, se realizarán 3 diluciones sucesivas de 1/10 cada una, para obtener tres muestras cuyas concentraciones finales sean 1/10, 1/100 y 1/1000.

Se funde el medio y se enfría a 45 – 50º C.

Se coloca asépticamente 1 ml de cada dilución en cada una de las cajas de Petri, previamente marcadas con las diluciones a sembrar.

Se vierte en cada una de las cajas de Petri el medio fundido. Se mezcla con suaves movimientos de rotación y se deja solidificar.

Las cajas se incuban invertidas en estufa a 37º C durante 48 Hs. El tiempo transcurrido desde que se efectúa la dilución hasta el agregado del medio de cultivo no debe ser superior a los 15 minutos.

 

Resultados:

Después de la incubación se procede al recuento de colonias, al igual que se realizó en el práctico anterior.

El valor normal admitido es de < 500 colonias de bacterias mesófilas / ml.

 

Investigación de coliformes

Determinación del número más probable de microorganismos coliformes totales:

METODO DE WILSON

 

Objetivo:

Determinar el grado de contaminación a través de la búsqueda de bacterias coliformes en la muestra de agua en estudio.

 

Materiales:

Muestras de agua

3 tubos de crioscopia conteniendo caldo Mac Conkey doble concentración y campanita Durham.

6 tubos de ensayo con caldo Mac Conkey simple concentración y campanita Durham.

Erlenmeyer conteniendo 90 o 99 ml de agua destilada estéril según la dilución a realizar

Pipetas de 10, 1 y 0,1 ml estériles.

 

 

Procedimiento:

Según el origen de la muestra se realizará la dilución correspondiente.

En tres tubos con 10 ml de caldo Mac Conkey doble concentración sembrar 10 ml de agua muestra.

En tres tubos con 5 ml de caldo Mac Conkey simple concentración sembrar 1 ml de agua muestra.

En tres tubos con 5 ml de caldo Mac Conkey simple concentración sembrar 0,1 ml de agua muestra.

Llevar todos los tubos a incubar a 37º C 24 – 48 Hs.

 

Resultados:

Se considera positivo todo tubo que presenta coloración amarrilla (ácido) y presencia de burbuja de aire (gas) en la campanita Durham, lo que indica que el agua posee bacterias coliformes.

 

 

Determinación de Pseudomonas aeruginosa:

Pasar 100 ml de muestra por filtro Millipore, o bien incubarlos en 100 ml de agar nutritivo (48 hs a 37°C). Sembrar sobre  agar Cetrimida. Utilizar otra placa como control de esterilidad del medio. Incubar a 37º por 24 horas.

Para indicar el resultado, observar las placas de agar Cetrimida con exposición a lámpara de luz UV (longitud de onda larga). Las colonias de Pseudomonas aeruginosa se ven fluorescentes.

Informar como Presencia o Ausencia.

 

Determinación de Escherichia coli:

Pasar 100 ml de muestra por filtro Millipore, o bien incubarlos en 100 ml de agar nutritivo (48 hs a 37°C). Sembrar sobre agar EMB Levine. Utilizar otra placa como control de esterilidad del medio. Incubar a 37º por 24 horas.

Para indicar el resultado, observar el crecimiento bacteriano. Las colonias de Escherichia coli se ven verdes con brillo metalico en el agar EMB levine.

Informar como Presencia o Ausencia.

 

Fecha: 23/8/2013 | Creado por: Lucia Del Valle
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